Qu'est-ce que pyroséquençage ?

Le pyroséquençage est une méthode de séquençage de l'ADN développée par la société 454 Life Sciences en 2005. C'est une technique basée sur la détection de la pyrophosphate généré lors de l'incorporation des bases nucléotidiques pendant la réaction de polymérisation de l'ADN.

Le pyroséquençage commence par l'amplification de l'ADN cible en utilisant la réaction en chaîne de la polymérase (PCR). Ensuite, les fragments d'ADN sont fixés sur des billes en suspension, chacune d'entre elles portant un fragment unique. Les billes sont ensuite déposées dans de petits puits individuels contenant les enzymes nécessaires à la réaction. Dans chaque puits, une seule base nucléotidique (adénine, cytosine, guanine ou thymine) est ajoutée à la fois.

Lorsqu'un nucléotide est incorporé, une réaction chimique se produit, libérant du pyrophosphate. Ce pyrophosphate est ensuite converti en adénosine triphosphate (ATP) par une enzyme appelée sulfurylase. L'ATP est utilisé par une luciférase pour produire de la lumière. La quantité de lumière produite est proportionnelle à la quantité de pyrophosphate généré lors de l'incorporation du nucléotide.

La lumière produite est détectée par un appareil de séquençage qui enregistre la séquence des bases nucléotidiques. En utilisant cette méthode, des centaines de milliers de séquences d'ADN peuvent être obtenues simultanément.

Le pyroséquençage est une technique très rapide et efficace pour séquencer de petits génomes ou certaines parties spécifiques du génome humain. Il a été utilisé dans de nombreuses études de recherche pour caractériser des séquences génétiques, identifier des mutations et des polymorphismes, ainsi que pour étudier des variants génétiques liés à des maladies. Cependant, avec l'avènement d'autres technologies de séquençage de nouvelle génération, le pyroséquençage a été largement remplacé par ces nouvelles techniques plus économiques et à haut débit.

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